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022-66387942細(xì)胞如若在生長過程中遇到漂浮困境,你有沒有想過會是操作不當(dāng)?!接下來,跟隨康康一起,探討這個非微生物原因?qū)е碌募?xì)胞培養(yǎng)問題,并找到讓它正常發(fā)展的解決方案。
復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因一:細(xì)胞本身貼壁能力較弱
比如細(xì)胞轉(zhuǎn)染的明星細(xì)胞293T,它生長較快,但貼壁能力弱,容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。
293細(xì)胞
∝解決辦法:提前使用明膠包被板子,增強(qiáng)吸附性。另外,還建議使用TC處理(tissue culture treated)的培養(yǎng)瓶/皿促進(jìn)細(xì)胞貼壁附著。
復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因二:培養(yǎng)基選擇錯誤
比如293T細(xì)胞培養(yǎng),推薦使用的培養(yǎng)基為DMEM(高糖)+10%FBS,但是如果使用RPMI-1640+10%FBS做為培養(yǎng)基,培養(yǎng)液糖分不足,故不夠支持細(xì)胞生長所需。雖然用錯了培養(yǎng)基,但這不代表細(xì)胞一定不能生長。但如果培養(yǎng)細(xì)胞中長時間使用不正確的培養(yǎng)基,甚至缺少必要營養(yǎng)組分(例如優(yōu)質(zhì)的血清),那細(xì)胞真的就漂了。
∝解決辦法:參照細(xì)胞使用說明書或者實(shí)驗(yàn)室預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,使用合適的培養(yǎng)體系。對于間充質(zhì)干細(xì)胞這類生存條件苛刻的細(xì)胞,培養(yǎng)基和血清的質(zhì)量要求會更高。
復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因三:復(fù)蘇過程中操作不當(dāng)
復(fù)蘇過程水溫太低,解凍時間不足,冰晶損傷了細(xì)胞;水溫太高,燙傷了細(xì)胞。
∝解決辦法:復(fù)蘇細(xì)胞過程,一般是從液氮罐中取出凍存管,立即放入到37℃水槽中快速解凍,搖晃凍存管,確保在1分鐘內(nèi)完成解凍。
復(fù)蘇后細(xì)胞漂浮原因四:離心對細(xì)胞造成損傷
去除凍存液中殘留的DMSO過程,在細(xì)胞復(fù)蘇過程中,解凍完畢之后,為了防止殘留DMSO對細(xì)胞的毒性影響,很多小伙伴會將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入到15mL離心管內(nèi),離心去上清,再重懸細(xì)胞接種培養(yǎng)。但這種情況,會導(dǎo)致剛復(fù)蘇還極為脆弱的細(xì)胞,因?yàn)殡x心機(jī)的離心力更為脆弱甚至破損死亡。
∝解決辦法:
其實(shí)除了少數(shù)對DMSO敏感的細(xì)胞之外(例如DMSO誘導(dǎo)HL-60分化成類中性粒細(xì)胞),絕大多數(shù)細(xì)胞應(yīng)在解凍之后,直接接種在培養(yǎng)皿內(nèi),隔天再更換新鮮培養(yǎng)基去除DMSO。
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