抗體特異性驗(yàn)證方法有什么？

抗體特異性從始至終備受重視，那么你知道抗體特異性驗(yàn)證方法有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、RNA 干擾(RNA Interference)

RNA 干擾是與靶基因序列同源的雙鏈 RNA(dsRNA)所誘導(dǎo)的一種特異性基因沉默，可以迅速阻斷基 因活性。siRNA(Small Interfering RNA)  是一種小 RNA 分子(大約 21-25 核苷酸) ，siRNA 只降解與其序列互補(bǔ)配對(duì)的 mRNA， 其調(diào)控的機(jī)制是通過(guò)互補(bǔ)配對(duì)來(lái)降低相應(yīng)靶位基因的表達(dá)，所以是一種典型的負(fù)調(diào)控機(jī)制。

在抗體特異性檢測(cè)中，可以通過(guò)這種“基因敲降"的方法來(lái)驗(yàn)證目標(biāo)蛋白表達(dá)量降低時(shí)，抗體與抗原發(fā)生結(jié)合產(chǎn)生的目的條帶 是否會(huì)消除或降低。

二、基因敲除(Knock Out，KO)

基因敲除是一種遺傳工程技術(shù)，敲除目的基因，產(chǎn)生目的蛋白不表達(dá)的陰性樣品，從而使部分功能喪失， 并可進(jìn)一步對(duì)生物體造成影響，進(jìn)而推測(cè)出該基因的生物學(xué)功能。在抗體特異性檢測(cè)中，可以通過(guò)這種“基因敲除"方法來(lái)驗(yàn)證目標(biāo)蛋白缺乏時(shí)，抗體是否會(huì)發(fā)生非特異性結(jié)合。

三、天然陰性樣本

天然陰性樣本是指部分蛋白質(zhì)存在組織、細(xì)胞特異性，可以利用天然不表達(dá)的細(xì)胞或組織作為陰性對(duì)照：如 CD20 不在 T 細(xì)胞中表達(dá)，PAX8 不 在 Hela 細(xì)胞中表達(dá)。此外，某些蛋白質(zhì)在特定的生理?xiàng)l件下才表達(dá)，或降低表達(dá)，或表達(dá)量的改變，也可以作為特異性的參考依據(jù)。

四、酶法檢測(cè)

適用于修飾蛋白的抗體驗(yàn)證。蛋白質(zhì)通常會(huì)有一些修飾形式，如磷酸化，糖基化等，可以通過(guò)檢測(cè)修飾前后 western blot 條帶的變化來(lái)判斷抗體的特異性， 這時(shí)候就需要添加相應(yīng)的酶來(lái)去除這些修飾形式，如磷酸酶，糖苷酶等。酶法檢測(cè)是驗(yàn)證抗體特異性的較為迅速簡(jiǎn)便的方法。

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